一、復(fù)蘇
1.把凍存管從液氮中取出來，當(dāng)即投入37℃水浴鍋中，細(xì)微搖擺（留意防止蓋子不緊致使液體進(jìn)入凍存管）。液體都消融后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。
2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
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3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖擺，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
4.標(biāo)好細(xì)胞品種和日期、培養(yǎng)人姓名等，放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5.依據(jù)細(xì)胞增長速度2-3天換一次培養(yǎng)基。
二、傳代
1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時要傳代。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加恰當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。
4.細(xì)胞都變圓后參加等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細(xì)胞，讓細(xì)胞懸浮起來。
6.把細(xì)胞吸到10ml或15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來。
8.依據(jù)細(xì)胞品種把細(xì)胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個，正常細(xì)胞傳3個。持續(xù)培養(yǎng)。
三、凍存
把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞品種，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
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